液相色譜柱是高效液相色譜(HPLC)系統的核心部件，其性能直接影響分離效果和實驗結果的準確性。色譜柱價格昂貴且易受污染或損壞，因此科學的養護至關重要。以下是液相色譜柱養護的詳細指南，涵蓋安裝、使用、存儲及問題處理等關鍵環節。

　　一、安裝前的準備

　　1. 確認色譜柱規格

　　根據樣品性質和分離需求選擇合適填料(如C18、氰基、氨基等)、粒徑(1.7μm~5μm)和孔徑的色譜柱。

　　檢查柱壓耐受范圍(通常為40600 bar)，避免超限使用。

　　2. 檢查封口與兼容性

　　新柱開封后需確認密封完好，檢查柱床是否平整(可通過觀察入口端填料有無裂紋或凹陷)。

　　使用前用少量純甲醇或乙腈浸潤填料，防止干燥填料直接接觸流動相導致收縮變形。

　　二、流動相的優化與處理

　　1. 流動相的過濾與脫氣

　　過濾：所有流動相需經0.22μm濾膜過濾，去除微粒雜質(尤其是緩沖鹽析出的顆粒)。

　　脫氣：超聲脫氣20分鐘或采用在線脫氣機，避免氣泡進入柱床導致局部壓力不穩或填料沖蝕。

　　2. pH值與溶劑兼容性

　　硅膠基質柱(如C18)適用pH 28，高pH會導致硅膠溶解；聚合物基質柱(如PLRPS)可耐受更廣pH范圍(112)。

　　避免使用含氯離子的緩沖液(如KCl)，優先選用磷酸鹽或醋酸鹽緩沖體系。

　　水性流動相中需加入一定比例有機溶劑(如5%10%乙腈)防止填料吸水膨脹。

　　三、樣品前處理

　　1. 去除懸浮物與雜質

　　樣品需經0.22μm濾膜過濾或離心(10,000 rpm以上)，杜絕固體顆粒堵塞柱頭。

　　復雜樣品建議萃取凈化(如SPE固相萃取)，去除蛋白質、脂類等大分子物質。

　　2. 溶劑匹配與稀釋

　　樣品溶劑需與流動相兼容，避免直接進樣強極性或高粘度溶劑(如原油)。

　　高濃度樣品需稀釋至線性范圍(通常不超過10 mg/mL)，防止過載污染柱床。

　　四、日常使用規范

　　1. 流速與壓力控制

　　初始使用時以低流速(如0.20.5 mL/min)平衡柱子，避免突然高壓沖擊。

　　常規流速不超過柱標稱上限(如4.6×250 mm柱流速≤1 mL/min)，超壓可能導致填料壓縮或破損。

　　2. 梯度洗脫后沖洗

　　完成梯度程序后，需用初始流動相(如高水相)沖洗30分鐘，清除緩沖鹽殘留。

　　長期使用緩沖鹽后，需用10%甲醇水溶液沖洗柱床，防止鹽析出堵塞。

　　3. 溫度控制

　　恒溫箱溫度波動需小于±2℃，高溫可能加速填料老化，低溫則影響傳質效率。

　　五、存儲與保養

　　1. 短期停用(<48小時)

　　保持流動相持續沖洗(如甲醇水混合相)，防止填料干燥開裂。

　　禁用純水或緩沖液靜置，避免微生物滋生或填料吸水膨脹。

　　2. 長期存儲(>48小時)

　　硅膠柱：用純甲醇或乙腈保存，定期更換保存溶劑(每12周)。

　　極性柱(如氨基柱)：儲存于甲醇水(50:50)混合液，防止氨基脫水失活。

　　反相柱(如C18)：可用異丙醇替代甲醇，抑制微生物生長。

　　六、常見問題與處理

　　1. 柱壓升高

　　原因：填料堵塞、篩板污染或柱頭塌陷。

　　處理：反向沖洗(如C18柱用甲醇→水反向沖洗)，更換入口篩板或切除柱頭12 cm。

　　2. 峰形變寬或拖尾

　　原因：填料老化、鍵合相流失或金屬離子污染。

　　處理：用0.1 M硝酸沖洗金屬污染，老化柱需再生或更換。

　　3. 保留時間漂移

　　原因：固定相流失或流動相組成變化。

　　處理：校準流動相比例，老化柱可嘗試高溫再生(如60℃甲醇沖洗)。