滅菌方法概述

熱滅菌：玻璃器皿，160~170℃，90~120min 或 180℃45~60min。

蒸氣滅菌：用于玻璃器皿、濾器橡膠塞、解剖用具、耐熱塑料器具、受熱不變性的溶液等，不同物品其有效滅菌壓力和時間不同，如培養用液、橡膠制品、塑料器皿等用 68kPa(115℃)高壓滅菌 10min; 布類、玻璃制品、金屬器械等用103kPa(121.3℃)高壓滅菌15~20min。

濾過除菌：適于含有不耐熱成分的培養基和試劑的除菌，用孔徑為 0.22μm 微孔濾膜可除去細菌和霉菌等，用此濾膜過濾兩次，可使支原體達到某種程度的去除，但不能除去病毒。

紫外線：紫外線的波長為 200~300nm，zui強是在 254 nm，6~15 平方米zui少一只紫外燈，高度要在 2.5m 以下，濕度 45%~60%，桿菌效果好，球菌次之，霉菌、酵母菌zui差，實驗前應不低于 30 分鐘的照射時間。

熏蒸消毒：當遇有細胞培養出現多次污染，或實驗室兩個月一次的常規消毒，均可用高錳酸鉀 5~7.5g，加甲醛(40%)10~15ml，混合放入一開放容器內，立即可見白色甲醛煙霧，消毒房間需封閉24小時，致少 4 小時以上。

煮沸消毒：緊急情況時使用，金屬器械和膠蹇在水中煮 20~30 分鐘，趁熱傾去水分即可使用。

化學消毒：化學藥品消毒滅菌法是應用能殺死微生物的化學制進行消毒滅菌的方法。實驗室桌面、用具及洗手用的溶液均常用化學藥品進行消毒殺菌。常用的有：2%煤酚皂溶液(來蘇爾)、0.25%新潔爾滅、1%升gong、3~5%甲醛溶液、75%酒精。

沸消毒法：

注射器和解剖器械等均可采用此法。先將注射器等用紗布包好，然后放進煮沸消毒器內加水煮沸。對于細菌的營養體煮沸約

15～30min，對于芽孢則需煮沸約 1～2h。

高壓蒸汽滅菌法：

高壓蒸汽滅菌用途廣，效率高，是微生物學實驗中zui常用的滅菌方法。這種滅菌方法是基于水的沸點隨著蒸汽壓力的升高而升高的原理設計的。當蒸汽壓力達到 1.05kg/cm2 時，水蒸氣的溫度升高到 121℃，經 15～30min，可全部殺死鍋內物品上的各種微生物和它們的孢子或芽孢。一般培養基、玻璃器皿以及傳染性標本和工作服等都可應用此法滅菌。

干熱滅菌法

通過使用干熱空氣殺滅微生物的方法叫干熱滅菌。一般是把

待滅菌的物品包裝就緒后，放入電烘箱中烘烤，即加熱至 160～170℃ 維持 1～2h。

干熱滅菌法常用于空玻璃器皿、金屬器具的滅菌。凡帶有膠皮的物品，液體及固體培養基等都不能用此法滅菌。

滅菌前的準備：

玻璃器皿等在滅菌前必須經正確包裹和加塞，以保證玻璃器皿于滅菌后不被外界雜菌所污染。常用玻璃器皿的包扎和加塞方法如下：平皿用紙包扎或裝在金屬平皿筒內;三角瓶在棉塞與瓶口外再包以厚紙，用棉繩以活結扎緊，以防滅菌后瓶口被外部雜菌所污染;吸管以拉直的曲別針一端放在棉花的中心，輕輕捅入管口，松緊必須適中，管口外露的棉花纖維統一通過火焰燒去，滅菌時將吸管裝入金屬管筒內進行滅菌，也可用紙條斜著從吸管包起，逐步向上卷，頭端的紙卷捏扁并擰幾下，再將包好的吸管集中滅菌。

干燥箱滅菌

將包扎好的物品放入干燥烘箱內，注意不要擺放太密，以免妨礙空氣流通;不得使器皿與烘箱的內層底板直接接觸。將烘箱的溫度升至 160～170℃并恒溫 1～2h，注意勿使溫度過高，超過 170℃，器皿外包裹的紙張、棉花會被烤焦燃燒。如果是為了烤干玻璃器皿，溫度為 120℃持續 30 分鐘即可。溫度降至 60～70℃時方可打開箱門，取出物品，否則玻璃器皿會因驟冷而爆裂。

用此法滅菌時，絕不能用油、蠟紙包扎物品。

火焰滅菌

直接用火焰灼燒滅菌，迅速*。對于接種環，接種針或其它金屬用具，可直接在酒精燈火焰上燒至紅熱進行滅菌。此外，在接種過程中，試管或三角瓶口，也采用通過火焰而達到滅菌的目的。

培養皿的滅菌

培養皿的滅菌一般有干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌兩種方法。滅菌的具體過程是先將需要滅菌的培養皿用報紙包起來，置于干燥箱內加熱到 160°C 滅菌 90-120 分鐘(干熱滅菌)，或在 121°C 高壓滅菌 20-30 分鐘(高壓蒸汽滅菌)，然后放到烘箱中干燥，去除蒸汽凝結的水。塑料制的培養皿一般都是一次性的，但也有一些塑料培養皿是可以重復使用的。

槍頭的滅菌

將放入槍頭盒中濕熱滅菌。121 度，15-20 分。為了避免水蒸

氣困擾，可以在槍頭盒外包上報紙，或者滅菌后置于溫箱中干燥。